Для запуска коагуляционного каскада необходимо наличие внешнего активатора, каковым может служить кремния диоксид, поэтому процесс свертывания крови быстрее происходит в стеклянных пробирках, так как кремния диоксид является базовым материалом стекла или в пластиковых пробирках с активатором свертывания. Активатор свертывания (clot activator) выполнен в виде напыления на внутренней стенке пробирки. После образования сгустка начинается этап его уплотнения и выделения сыворотки. На практике ретракция сгустка ускоряется центрифугированием пробирок с кровью.Для получения максимально чистой сыворотки рекомендуется соблюдение трех условий:1. После забора крови в пробирку в соответствии с инструкцией необходимо осторожно однократно перевернуть пробирку для более полного контакта крови с активатором свертывания;2.
Содержание:
- Законодательная база российской федерации
- Вакуумные пробирки для взятия крови
- Анализ крови на антитела к кори
- Взятие, условия хранения и доставки венозной крови для проведения ифа и пцр
Законодательная база российской федерации
Образец носового секрета, взятого любым из перечисленных выше способов и помещенного в вирусологическую транспортную среду <*, должен быть доставлен для исследования в течение 48 часов на холоде (при температуре 4 — 8 °C). Если условия не позволяют быстро отправить образец смыва из носоглотки, пробирку с тампоном следует энергично встряхнуть так, чтобы смыть клетки, а затем извлечь тампон. Назальные аспираты или смывы центрифугируют при температуре 4 °C при 500 g (1500 об./мин.) в течение 5 минут, затем осадок ресуспендируют в 2 мл питательной среды для клеточных культур.
Ресуспендированный осадок и надосадочную жидкость хранят раздельно при температуре -70 °C и транспортируют в лабораторию на сухом льду в герметично закрытых флаконах, чтобы избежать попадания в них углекислоты.
Вакуумные пробирки для взятия крови
Последний представляет собой тиксотропный кополимер, который тяжелее сыворотки, но легче кровяного сгустка, поэтому после центрифугирования гель в виде тонкой полоски занимает промежуточное положение и служит разделительным барьером. Стабильность такого барьера гарантирована в течение 5-7 дней при хранении пробирки с кровью при комнатной температуре. Оптимальные сроки сохранности образца крови в данных пробирках составляет при комнатной температуре 6 часов, при хранении в холодильнике (+4ºС) – 24 часа.
Повторное центрифугирование пробирок, особенно с гелем, не допускается. Полученная сыворотка крови применяется для очень широкого спектра лабораторных биохимических, ИФА и иммунологических исследований: белковый состав, ферменты, гормоны, онкомаркеры, ВИЧ-инфицирование, гепатиты и пр.
Анализ крови на антитела к кори
Важно
Фторид натрия и ЭДТА калия связывают ион Са2+, заменяя в крови 1 ион кальция на 2 иона натрия или калия. Следствием этого является повышение напряжения ионов в межклеточной жидкости и выкачивание воды из внутриклеточного пространства в межклеточное, сморщивание клеток крови с умеренным «выдавливанием» из эритроцитов гемоглобина. Поэтому видимый гемолиз свойственен образцам крови с данной добавкой.
Глюкоза превращается в лактат в результате комплекса реакций, включающего в себя различные этапы. Фторид ингибирует один их последних этапов разрушения глюкозы, начальные этапы с участием гексокиназы и фосфофруктокиназы блокируются менее эффективно, поэтому можно наблюдать снижение содержания глюкозы в образце крови на 6-7% от первоначального.
Взятие, условия хранения и доставки венозной крови для проведения ифа и пцр
Для более чистого разграничения плазмы крови и сгустка применяются специальные пробирки, содержащие кроме гепарина инертный олефиновый гель. Последний представляет собой тиксотропный кополимер, который тяжелее плазмы, но легче форменных клеток крови, поэтому после центрифугирования гель в виде тонкой полоски занимает промежуточное положение и служит разделительным барьером. Фторид натрия/ЭДТА калия. Цвет крышечки – серый Добавление фторида натрия и ЭДТА калия в пробирку позволяет предотвратить разрушение глюкозы крови (процесс, называемый гликолизом) и сохранить ее уровень во взятом образце крови.
Фторид натрия и оксалат калия выступают в качестве антикоагулянтов, связывая ионы Са2+ и, кроме того, фторид натрия стабилизирует уровень глюкозы. Глюкоза разрушается до пирувата и лактата при последовательном осуществлении различных энзиматических реакций.
При комнатной температуре время доставки не должно превышать 60 мин после взятия крови. Если доставка крови в лабораторию осуществляется в течении дня, то она хранится при температуре +40С-+60С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию.Во время транспортировки пробирки и контейнеры с кровью должны быть соответствующим образом защищены от вредного воздействия окружающей среды и погодных условий. При транспортировке венозной крови должны строго соблюдаться правила техники безопасности, асептики и антисептики.Пробирки должны быть промаркированы, упакованы и плотно закрыты.
Упаковка должна быть удобной для транспортировки. Сроки хранения зависят от исследуемого показателя, температуры хранения и антикоагулянта, с помощью которого осуществляется взятие крови.
Производится путем введения в нос 2 — 3 миллилитров стерильного физиологического раствора шприцем через надетый на него тонкий резиновый зонд, после чего жидкость отсасывают и помещают в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой, в которой находится специальная транспортная среда для вирусов. Полоскание (промывные воды). Со слизистых оболочек носоглотки получают путем полоскания горла небольшим количеством физиологического раствора (2 — 3 мл); промывные воды вносят в транспортную среду для вирусов. Назофарингиальные смывы. Для взятия используют ватный тампон, которым протирают слизистую оболочку носоглотки с достаточным усилием, чтобы снять часть эпителиальных клеток.
Тампоны помещают в маркированные стерильные пробирки с завинчивающимися крышками, в которых содержится 2 — 3 мл транспортной среды для вирусов.
Для того чтобы выявить инфекционную болезнь, а также подтвердить наличие или отсутствие должной иммунной реакции на нее, специалисты применяют анализ крови на антитела к кори. В чем же состоит его особенность? Значимость антител для человека Когда вирус кори (морбилливирус), преодолевая естественные защитные барьеры организма, попадает во внутреннюю среду, он придается активному размножению и распространению. В это же время иммунная система производит необходимое количество защитных белков – антител: вырабатываемые структуры обнаруживают инородные клетки, входят с ними в контакт и купируют их развитие.
Если организм изначально имел в наличии большое количество иммуноглобулинов, то процесс его очистки от враждебных тел пройдет как можно быстрее без каких-либо осложнений. Принцип действия защитной реакции на вирусное вторжение основывается на так называемой системе «замочка и ключика».
Внимание
В случае необходимости ее можно получить из любой вены (запястья, тыла ладони, над большим пальцем и т.д.). У новорожденных и грудных детей кровь обычно берется из лобной, височной или яремной вены.При взятии крови из вены необходимо избегать: мест шрамов, гематом; вен, используемых для переливания растворов; ножных вен (у больных диабетом, при нарушениях периферического кровотока, ангиопатиях). Оборудование Для венепункции можно использовать три варианта пункционных систем:• одноразовые пластиковые системы (вакутейнеры), состоящие из контейнера с навинчивающейся на него одноразовой иглой и пробирки с плотно прилегающей пробкой и вакуумом внутри;• одноразовые шприцы с подходящим диаметром иглы;• иглы с внутренним диаметром 0,55-0,65 мм.
Условия транспортировки венозной крови Правильно собранная венозная кровь должна быть своевременно доставлена в лабораторию.
Вирус кори чрезвычайно чувствителен к повышению температуры. Поэтому образцы материалов, предназначенные для выделения вируса, должны быть транспортированы в лабораторию как можно быстрее и в условиях строгого соблюдения холодовой цепи. Сбор и транспортировка вируссодержащих образцов проводится на базе региональных центров по надзору за корью. 2.1. Сбор, транспортировка и хранение образцов мочи Для исследования берут пробы мочи в объеме 10 — 50 мл. Целесообразно использовать первую утреннюю порцию мочи, содержащую большее число эпителиальных клеток, из которых, как правило, и выделяется вирус кори. Наиболее успешно удается выделение вируса из образцов мочи, полученных на самых ранних стадиях болезни — в момент появления сыпи и максимум в течение 5 дней от момента высыпания. Мочу собирают в стерильную емкость, охлаждают до +4 — 8 °C, центрифугируют в ближайшие несколько часов после забора.
На месте сбора образцов сывороток крови следует хранить дубликаты списков обследованных лиц и результаты исследования сывороток в течение не менее 1 года. 1.2. Техника первичной обработки крови Для получения сыворотки пробирку с кровью оставляют в наклонном (под углом 10° — 20°) положении при комнатной температуре на 30 минут для образования сгустка, после чего пробирку с кровью встряхивают (для отделения сгустка от стенки пробирки), закрывают пробкой и ставят на ночь в холодильник при температуре +4° — 8 °C. После отделения сыворотки от сгустка (пробирки можно обвести по внутренней поверхности пастеровской пипеткой), ее центрифугируют при 500 g (1500 об./мин.) в течение 7 — 10 минут.
Затем сыворотку отсасывают пипеткой в стерильные центрифужные (пластиковые) пробирки (или эппиндорфы) с обязательным переносом на них этикетки с соответствующей пробирки.
Только в случае получения сомнительных результатов в LgM-ИФА целесообразно использовать LgG-ИФА, однако при этом необходимо иметь для исследования две сыворотки, полученные от больного в активной фазе заболевания (4 — 5 день сыпи) и в период реконвалесценции (2-ую сыворотку допускается брать через 1 — 2 недели, но не позже 1,5 мес. с момента заболевания). 1.1. Техника взятия, маркировка и регистрация проб крови Для серологической диагностики кори можно использовать как капиллярную, так и венозную кровь. Капиллярную кровь берут из пальца в асептических условиях.
Перед взятием крови кисть руки пациента согревают горячей водой, затем насухо вытирают чистым полотенцем. Палец, протерев 70 °C спиртом, прокалывают стерильным скарификатором одноразового пользования.